Funcionalización

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Funcionalización

Las vesículas extracelulares (EVs) poseen cualidades notables, incluyendo una alta captación celular, baja inmunogenicidad, excelente biocompatibilidad y la capacidad de atravesar fácilmente la barrera hematoencefálica, lo que las convierte en una generación prometedora de plataformas de entrega de medicamentos.

No obstante, la falta inherente de especificidad en las EVs presenta un desafío notable. Si bien las EVs son aclamadas por su capacidad para transportar carga biológica a células específicas, nuestra especialización radica en la personalización de las EVs para mejorar su impacto terapéutico.

Funcionalización Acciones Métodos
Carga
  • Biofarmacéuticos
  • ASOs, ARN, ADN
  • Plásmido
  • Péptido
  • Transfección
  • Electroporación
  • Sonicación
Modificación de superficie
  • Cualquier molécula de elección
  • Anticuerpo
  • Nanocuerpo
  • Péptido
  • Química clic
  • Ligadura enzimática
  • Avidina-biotina

Estudio de caso

EV-nanobody: captación específica en células diana

Los RBCEVs conjugados con nanocuerpos (EGFR-VHH-EVs) muestran una captación aumentada en células diana durante experimentos de co-cultivo con células 4T1 de ratón que co-expresan tdTomato y EGFR humano, y células 4T1 parentales. Los RBCEVs, marcados con CFSE (verde), muestran una acumulación intracelular mejorada en las células 4T1 tdTomato-hEGFR positivas (rojo), mientras que no se observa acumulación en las células 4T1 parentales tdTomato-hEGFR negativas (azul).

EV-nanobody-ácido nucleico: efecto terapéutico in vitro

Los RBCEVs dirigidos a EGFR (EGFR-VHH-EVs) cargados con siARN GFP lograron un silenciamiento preciso del GFP inestabilizado en células CA1a-dGFP (imagen superior). Los RBCEVs cargados con oligonucleótidos antisentido (ASOs) contra miR-125b, un microARN tumorigénico, demostraron una reducción aproximada de ~10 veces mayor con los RBCEVs dirigidos a EGFR en comparación con los no dirigidos (imagen inferior izquierda). Además, los RBCEVs dirigidos a EGFR cargados con ASOs de miR-125b redujeron significativamente la viabilidad celular de las células 4T1 a ~20% en comparación con el control no tratado (imagen inferior derecha).

EV-nanobody-ácido nucleico: efecto terapéutico in vivo

Los EVs cargados con miR-125b ASO dirigidos a EGFR suprimen eficazmente la progresión tumoral. Se estableció un modelo de cáncer de mama metastásico en pulmón con expresión de hEGFR mediante la inyección sistemática de células 4T1-tdTomato-hEGFR en ratones NSG-SGM3 para el tratamiento intratraqueal con EVs (imagen superior). El análisis de RT-qPCR mostró que los EVs cargados con miR-125b ASO dirigidos a EGFR resultaron en un silenciamiento significativamente mayor solo en células tumorales, pero no en células pulmonares (imagen inferior izquierda). El análisis citométrico de flujo de las células pulmonares de cada tratamiento reveló que los EVs EGFR-VHH cargados con miR-125b ASO demostraron los mejores efectos supresores tumorales (imagen inferior en el medio). Esta tendencia se reflejó en el % de área pulmonar ocupada por las células tumorales, evaluada a través de la fluorescencia de tdTomato en secciones pulmonares (imagen inferior derecha).